生命科学光学
比率成像的基础是某些荧光团对特定环境因素的敏感性。这些环境因素可能包括:pH 值、某些离子(如 Ca2+ ) 浓度或其他荧光团物体的接近程度(如 FRET )。 (参考内容: FRET)。 在钙成像的情况下,荧光团 Fura-2 具有随 Ca2+ 浓度变化的吸收光谱,而荧光团 Indo-1 具有基于 Ca2+ 水平变化的发射光谱。
Fura-2 是多路复用应用的较好选择,因为紫外激发波长使绿色通道对于许多流行的绿色荧光团中的任何一种都是开放的。通过测量在 340 nm 和 380 nm(荧光发射信号峰值)处捕获的数字图像上的强度比率,可以跟踪不同位置处的钙浓度变化。
Semrock 的 BrightLine® FURA2-C 滤光片组 (图 1 和 图 2 ) 提供了出色的亮度,实现了饱和信号强度与自由信号强度的平衡。因此,您可以通过对相机设置的调整获得准确的比率计算。
图 1. 高 (饱和 Ca2+) 浓度
图 2. 低 (游离 Ca2+) 浓度