使用VersaChrome^™ 滤光片进行光谱成像

传统的光谱成像系统通常无法提供薄膜干涉滤光片的主要优点，即高透过率、陡的光谱边缘和高的通带外阻挡。现在有了 VersaChrome^™ 滤光片，这些优势可以在简单的光谱成像系统中实现，应用范围从荧光显微镜到高光谱成像。

在荧光显微镜中演示光谱成像，使用 Semrock VersaChrome^™ 可调式滤光片（TBP01-620/14）将三个光谱重叠的荧光团（荧光蛋白）标记在一个标准正置显微镜的发射通道中，获得了一个“波长堆栈”图像（对应于一系列几乎连续的发射波长）。图1显示了以 1 nm 间隔拍摄的 61 幅图像中的 6 幅，图 2 显示了从仅存在单个荧光团的部分图像中获取的测量强度光谱。用 SYTOX^® Orange 橙色标记的细胞核很容易与其他细胞结构区分开来（图 1）。然而，由于 F-肌动蛋白和线粒体被高度重叠的荧光团标记（Alexa Fluor^™ 568 和 MitoTracker^® Red)，线性分解是识别相应细胞成分的必要条件。图 3 显示了用线性分解分解的图像。

值得注意的是，这些可调式滤光片的光谱特性对于光的 s- 偏振和 p- 偏振几乎是相同的，这是使用液晶可调谐滤光片和声光可调谐滤光片不容易获得的特性。偏振性对于光谱成像系统来说是有益的，然而在大多数仪器中，电子可调谐滤光片的偏振限制导致了至少一半的信号损失。因此，VersaChrome^™ 可调式滤光片不仅提高了光谱成像的通光量，而且简化了仪器的复杂性。